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安徽間充質干細胞外泌體提取暨南大學

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發布時間: 2023-12-15 04:00
最后更新: 2023-12-15 04:00
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詳細說明
所有培養的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。
有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的分子機制剛剛開始研究。
外泌體被視為特分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創診斷的開發。
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一類外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。
它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4, RAB5和 RAB11主要出現于早期以及回收的核內體中,RAB7 和 RAB9主要出現于晚期的核內體。
現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。
除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。
外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63, CD81 和CD9))、
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熱休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90以及一些細胞特的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。
其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(GAPDH, 烯醇化酶 1, 醛縮酶 1, PKM2, PGK1, PDIA3, GSTP1,DPP4, AHCY, TPL1, 抗氧化蛋白, P4HB, LDH, 親環素 A,FASN, MDH1 和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子, ARF1, CD2, 人類紅細胞膜整合蛋白, SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。
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一是超速離心法,這是外泌體提取最常用的方法 。
此種方法得到的外泌體量多,純度不足,電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊, 由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準,也有一些研究認為此種 方法得到的是微泡不是外泌體 。
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三是密度梯度離心法, 用此種方法分離到 的外泌體純度 高,前期準備工作繁雜,耗時,量少。

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五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。
該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度。
由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。
2016.9 《Scientific Reports》 雜志發表了該方法數據,表明PS法可提取相當高純度的外泌體。
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